纯（chún）氟（fú）油Fluo-Oil 135(氟油（yóu）3M Novec HFE7500电子氟化液的替代品)

Fluo-Oil 135（简称（chēng）FO135） 是一（yī）种纯（chún）氟化油，可用于替换氟（fú）油3M Novec HFE7500电子（zǐ）氟化（huà）液（yè）。 Fluo-Oil 135氟油的（de）化（huà）学和物（wù）理化学性质与（yǔ）3M Novec HFE7500 相似，如下表所示:

优势

生物（wù）相容性、可重复性和（hé）稳（wěn）定性（xìng）。

如何使（shǐ）用？

氟油Fluo-Oil 135用于稀（xī）释FluoSurf Neat表面活（huó）性剂或已经用Fluo-Oil 135油稀释的表面（miàn）活性剂。

（由于FluoSurf Neat表面活性剂是一种PFPE-PEG结构的复杂高效纯表面活性剂，因为类（lèi）似于PFPE-PEG结（jié）构（gòu）的纯表（biǎo）面活性剂如FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌（qiàn）段或三嵌段表面（miàn）活性剂，Surf 含氟表面活性剂等，基本上都可以使用纯氟（fú）油Fluo-Oil 135进行（háng）稀释。稀（xī）释（shì）的浓度（dù）从0.2%到（dào）12%之（zhī）间（jiān）。）

保（bǎo）存

室温下避光保（bǎo）存（cún）

安全（quán）注（zhù）意事项

● 避免吸入、摄入（rù）和接触皮肤（fū）和（hé）眼睛

● 穿戴耐化（huà）学腐蚀的个人防护装备

● 戴上合适的（de）手套

● 穿合适的（de）防护服

● 戴侧护罩的安全（quán）眼镜（jìng）

与3M HFE7500油产生液滴性能的测试比较

分别用（yòng）3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化油（yóu）稀释FluoSurf neat表（biǎo）面活（huó）性剂，得到4w/w%的质量（liàng）浓度（dù）。

水滴产生或油包水液滴产生的两相流速（sù）：

油相流速为300μL/hr，水相流（liú）速为100μL/hr。

水（shuǐ）相为PBS溶液或100μM荧光素的PBS溶液（用于测试（shì）液滴的泄露）

倒置显微镜观察和Image J软件分（fèn）析（xī）。

一、液（yè）滴（dī）尺寸及其分（fèn）布

在Fluo-Oil 135和HFE7500油（yóu）中，产生相似（sì）尺寸的水滴。在（zài）既定流速参数下，液（yè）滴的平（píng）均直径为110μm。液滴尺寸的（de）CV分（fèn）别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴（dī）稳定（dìng）性

大（dà）多（duō）数研究团队使用液滴微流体进行细胞封装或 PCR 应用。 因此，需（xū）要通过（guò） PCR 的加热循（xún）环以及在 37°C 下长期孵育来产（chǎn）生稳（wěn）定的液滴。 表面活性剂的选（xuǎn）择至关重要，但选择油同样重（chóng）要，以确保可重复的实（shí）验以及单（dān）分散液（yè）滴群的生成和保存。

分别从三个方（fāng）面测试液滴的稳定性：一是把（bǎ）液滴重新注入到（dào）玻璃观察腔室内（nèi）；二是经（jīng）典的PCR热循环过（guò）程，循环过程30次，每次热循环（huán）为98°C运行10s, 50°C运（yùn）行5s, 72°C运行10s；三是置于37℃的培养箱内（nèi）放置3天。对1万个液滴进行分析。

无论是在（zài） Novec™ HFE 7500 还是 Fluo-Oil™ 135 中形成 FluoSurf™ 稳定的（de）液滴，在（zài） PCR 加（jiā）热循环后或在 37°C 孵（fū）育 3 天后（hòu），液滴平均尺寸在生成时保持不变 [约（yuē） 110μm (0.7nL)] 。此外，液滴种群仍然是单分散的（de）。 根据统计分析，计算（suàn）出在（zài）加热循环后，只有 5% 的整（zhěng）体液滴的大（dà）小与平均初始液滴直径的差异超过 10%。

将氟化油（yóu）从 Novec™ HFE 7500 切换到 Fluo-Oil™ 135 对液（yè）滴（dī）稳定性没有（yǒu）影响。

三、液滴（dī）内的分子滞留

基于液滴的化学或（huò）生化分析依赖于试剂在单（dān）个液滴中保持隔（gé）离。 泄漏（lòu）到（dào）连续（xù）相（xiàng）和液滴（dī）之间的交（jiāo）换（huàn），即使很（hěn）低，也会影（yǐng）响（xiǎng）结（jié）果的完整性，因（yīn）此，分子保留是选择氟化（huà）油时（shí）要考虑的重（chóng）要参数。 众（zhòng）所（suǒ）周知，氟化油（yóu）会限制液滴之间的（de）分子（zǐ）交换，因（yīn）此应验证切换油的影响。

同时生成两种油包水乳液（yè）[“空”（负载 PBS）和“满”（负载荧光素）液滴]，一次使用（yòng） Novec™ HFE7500，然后使用 Fluo-Oil™ 135 作为连续相。 两（liǎng）种混（hún）合物，每一种都包含（hán）两个种群，在（zài） 37°C 下孵育，并在不同（tóng）的时间点（diǎn）拍摄照片。 使（shǐ）用 ImageJ 软件对液滴内荧光（guāng）强（qiáng）度的演变进行了统计定量分析。

上图显示（shì）了两个群体之间平均荧光强（qiáng）度差异的演变（染料加载和空液滴）以及在初始时间点和（hé） 48 小时后相关的荧光和（hé）明（míng）场图片。

在 24 小时的过程中，两种（zhǒng）氟化油产生的液滴（dī）中（zhōng）荧光素的泄漏率相似（约 15% 泄漏），并且在 Fluo-Oil™ 135 中产生液滴（dī）的情况下保持恒定 3 天。相反，在（zài） 24 小时后（hòu）， Novec™ HFE7500 中液滴的泄漏继（jì）续减少并达到 30% 左右。 这种较长孵（fū）育时间的较差（chà）保留性能（néng）可归因于后一种油的粘度略低，加速了（le）液（yè）滴之间更快的分子交（jiāo）换。

结（jié）论

对于基于液滴的微流（liú）体应用，从一种氟化油类型（xíng）切换到（dào）另一种类型可能会（huì）对微流体实验的过（guò）程产生（shēng）重大影响（xiǎng），尤其是对液（yè）滴的有效生成产生（shēng）重大影响。 在氟（fú）油3M Novec™ HFE7500电（diàn）子氟化液 和 氟油Fluo-Oil™ 135 的情（qíng）况下，已证实更换这（zhè）两种氟化油对实验条件（jiàn）和结果没有（yǒu）影响。 当使用 Fluo-Oil™ 135 作为连续相时，甚至可以（yǐ）观察到荧光素在液滴（dī）内的更好保（bǎo）留。

氟化油Fluo-Oil™ 135 是用于液滴微流体应用（yòng）的3M Novec™ HFE7500 氟油（yóu） 的有效替代品（pǐn）。